簡(jiǎn)要描述:小麥胚芽凝集素,AF647標記(下文簡(jiǎn)稱(chēng)“AF647 WAG"), 是一種與N-乙酰-D-葡萄糖胺和唾液酸結合的凝集素,可能是明亮和綠色熒光中最亮的WGA綴合物。它是目前研究多、應用廣泛的一類(lèi)凝集素。
產(chǎn)品分類(lèi)
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品牌 | Life-iLab/李記生物 | 貨號 | AC15L016 |
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供貨周期 | 現貨 | 應用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),綜合 |
產(chǎn)品描述
小麥胚芽凝集素, AF647標記(下文簡(jiǎn)稱(chēng)“AF647 WAG"), 是一種與N-乙酰-D-葡萄糖胺和唾液酸結合的凝集素,可能是明亮和綠色熒光中最亮的WGA綴合物。它是目前研究多、應用廣泛的一類(lèi)凝集素。由于WGA與糖綴合物結合,其衍生物和綴合物被廣泛用于標記細胞膜和纖維化瘢痕組織,用于熒光成像和分析。WGA的糖結合特異性與β-1,4-GlcNAc-連接殘基的序列,即幾丁質(zhì)酶有關(guān)。每個(gè)單體包含兩個(gè)相同的非相互作用的結合位點(diǎn),它們與3或4β-1,4-GlcNAc單元互補。在所檢測的單糖中,只有GlcNAc與WGA結合。甘露聚糖不結合,而GalNAc只能弱結合。WGA與含有Galβ(1--4)GlcNAcβ(1--3)重復序列(即聚乳糖胺型聚糖)的大寡糖中的內部GlcNAc殘基具有高親和力結合。N-乙酰神經(jīng)氨酸只參與與WGA的低親和力相互作用。WGA顯示了復雜的糖類(lèi)特異性模式,可用于復雜碳水化合物的結構分析。
技術(shù)資料
Ex (nm): | 656 | Em (nm): | 670 |
分子量: | N/A | 溶劑: | Water |
訂購信息
產(chǎn)品名稱(chēng) | 貨號 | 規格 |
小麥胚芽凝集素,AF647標記 | AC15L016 | 1mg |
運輸與保存
藍冰運輸。-20℃避光防潮保存,有效期12個(gè)月。
適用儀器
熒光顯微鏡 | |
激發(fā): | Cy5濾波片 |
發(fā)射: | Cy5濾波片 |
推薦孔板: | 黑色透明 |
使用方法
溶液配制
1. AF647 WAG儲備溶液(200X)配制
將 500 µL ddH2O 添加到粉末小瓶中,制成 2 mg/mL 的儲備溶液?!咀ⅰ浚褐匦屡渲频膬淙芤嚎稍?4℃ 下短期儲存,或在 -20℃ 下長(cháng)期儲存。
2. AF647 WAG工作溶液(1X)配制
將 5 μL 200X WGA 儲備溶液添加到 1 mL HHBS 緩沖液中?!咀ⅰ浚翰煌毎档膬?yōu)化染色濃度可能不同?;罴毎耐扑]起始濃度為 5-10 µg/mL。
操作步驟
1. 活細胞染色
(1) 用 HHBS 緩沖液清洗細胞兩次。
(2) 添加 100 µL AF647 WAG 工作溶液。
(3) 將細胞與AF647 WAG 工作溶液在 37°C 下孵育 10-30 min。
(4) 用 HHBS 緩沖液清洗細胞兩次。
(5) 使用 FITC 濾光片組在熒光顯微鏡上成像細胞。
2. 固定細胞染色
(1) 在PBS中使用4%的甲醛固定細胞?!咀ⅰ浚簩τ诠潭毎と旧?,建議在沒(méi)有透化步驟的情況下進(jìn)行染色。固定后透化步驟會(huì )導致細胞內區室染色,如高爾基體和內質(zhì)網(wǎng) (ER) 結構染色。
(2) 添加 100 µL AF647 WAG 工作溶液。
(3) 在室溫下用AF647 WAG 工作溶液孵育細胞 10-30 min。
(4) 用 HHBS 緩沖液清洗細胞兩次。
(5) 使用 FITC 濾光片組在熒光顯微鏡上成像細胞。
圖示
圖 1. 使用AF647 WAG 以 5 µg/mL的濃度在活細胞(Hela細胞) 染色 30 min,然后用 Hoechst 33342(Cat# AC12L021)染色。最后使用帶Cy5和DAPI 濾光片組的熒光顯微鏡成像。
注意事項
1. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
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