原代細胞凍存液的制備和使用對于細胞的保存和復蘇具有重要意義。以下是制備和使用原代細胞凍存液的步驟:
制備:
準備所需試劑和器材,包括DMSO、FBS、培養基、離心管、移液管、細胞計數板、顯微鏡等。
收集細胞樣品,加入適量培養基進(jìn)行洗滌。
棄去培養基,加入適量DMSO和FBS混合液進(jìn)行細胞凍存液的制備。
將細胞凍存液分裝到凍存管中,每個(gè)凍存管中加入1毫升細胞凍存液,標記好凍存管。
將凍存管放入梯度凍存盒中,然后保存至-80℃過(guò)夜(如果沒(méi)有凍存盒,可以先在4℃冰箱放置30 min,然后轉移至-20℃放置1-2 h,最后轉移至-80℃過(guò)夜),第二天取出放入液氮罐,并記錄好位置信息。
使用:
準備所需器材和試劑,包括細胞凍存液、離心管、移液管、培養基等。
從液氮罐中取出凍存管,迅速放入37℃水浴鍋中進(jìn)行復蘇。
復蘇后,將細胞轉移至培養基中進(jìn)行培養。
保存:
在復蘇后數小時(shí)內將細胞傳代并培養,以便快速擴增和存儲。
可以將細胞保存在常規培養箱中,但需要注意溫度和濕度的控制。
可以使用細胞凍存盒將細胞保存于-80℃冰箱中,以延長(cháng)細胞的存活時(shí)間。